Tha fios air sreathan genomic a’ mhòr-chuid de bhìorasan.Probes searbhag niuclasach a tha nan earrannan goirid de DNA a chaidh a dhealbhadh gus a dhol còmhla ri earrannan viral DNA no RNA co-phàirteach.Tha am freagairt slabhraidh polymerase (PCR) na dhòigh nas èifeachdaiche airson lorg bhìorasach.Chaidh dòighean sgrùdaidh trochur àrd a leasachadh o chionn ghoirid.
A. Teicneòlas tar-chuiridh searbhag niuclasach
Tha tar-chur searbhag niuclasach, sa mhòr-chuid a’ toirt a-steach blotting Southern (Southern) agus blotting a Tuath (Tuath), na dhòigh ùr a tha a’ leasachadh gu luath ann an raon sgrùdaidh bhìoras.Is e feallsanachd a’ mheasaidh tar-chuiridh a bhith a’ cleachdadh earrannan goirid de DNA (ris an canar “probe”) a tha air an dealbhadh gus a dhol còmhla ri earrannan viral DNA no RNA co-phàirteach.Le teasachadh no làimhseachadh alcaileach, tha targaid DNA no RNA dà-shreath air an sgaradh ann an sreathan singilte agus an uairsin air an gluasad air taic làidir.Às deidh sin, thèid probe a chur ris agus a cho-fhilleadh leis an targaid DNA no RNA.Leis gu bheil an probe air a chomharrachadh le isotope no niuclid neo-rèidio-ghnìomhach, faodar an DNA targaid no RNA a lorg tro autoradiography no leis an t-siostam biotin-avidin.Leis gu bheil a’ mhòr-chuid de genomes viral air an clonadh agus air an òrdachadh, faodar an lorg le bhith a’ cleachdadh sreathan a tha sònraichte do bhìoras mar probes anns an sampall.An-dràsta, tha na dòighean tar-chuiridh a’ toirt a-steach: dot blot , tar-chuir in situ ann an ceallan , blotting DNA (DNA) (blot a deas) agus RNA blotting (RNA) (blot a tuath).
Teicneòlas B.PCR
Anns na bliadhnachan mu dheireadh, chaidh sreath de dhòighean leudachaidh searbhag niuclasach in vitro a leasachadh stèidhichte air PCR, gus bhìorasan neo-mhothachail no neo-àiteach a dhearbhadh.Is e dòigh a th’ ann am PCR a dh’ fhaodar sreath DNA sònraichte a cho-chur tro fhreagairt in vitro polymerase.Tha pròiseas PCR a’ toirt a-steach cearcall teirmeach de thrì ceumannan: dì-nàdurachadh, annealing, agus leudachadh Aig teòthachd àrd (93 ℃ ~ 95 ℃), tha an DNA dà-shreath air a sgaradh ann an dà shreath DNA singilte;an uairsin aig teòthachd ìosal (37 ℃ ~ 60 ℃), dà primers nucleotide synthesized anneal gu na roinnean DNA co-phàirteach;ach aig an teòthachd iomchaidh airson Taq enzyme (72 ℃), bidh synthesis de shlabhraidhean DNA ùra a’ tòiseachadh bho primer 3’end a’ cleachdadh DNA co-phàirteach mar theamplaidean agus nucleotides singilte mar stuthan.Mar sin às deidh gach cearcall, faodar aon slabhraidh DNA a leudachadh gu dà shlabhraidh.Le bhith ag ath-aithris a’ phròiseis seo, faodar gach slabhraidh DNA air a cho-chur ann an aon chearcall a chleachdadh mar theamplaid anns an ath chearcall, agus tha an àireamh de shlabhraidhean DNA air a dhùblachadh anns gach cearcall, a’ ciallachadh gu bheil cinneasachadh PCR air a mheudachadh ann an astar log 2n.Às deidh 25 gu 30 cearcallan, tha cinneasachadh PCR air a chomharrachadh tro electrophoresis , agus faodar na toraidhean DNA sònraichte fhaicinn fo sholas UV (254nm).Airson a bhuannachd a thaobh sònraichteachd, cugallachd, agus goireasachd, chaidh PCR a ghabhail os làimh ann am breithneachadh clionaigeach air mòran ghalaran viral leithid HCV, HIV, CMV, agus HPV.Leis gu bheil PCR gu math mothachail, is urrainn dha DNA bhìoras a lorg aig ìre fg, bu chòir an obair a dhèanamh gu faiceallach gus dearbhadh meallta a sheachnadh.A bharrachd air an sin, chan eil toradh adhartach ann an deuchainn searbhag niuclasach a’ ciallachadh gu bheil bhìoras gabhaltach beò san sampall.
Le cleachdadh farsaing de innleachd PCR, tha dòighean agus dòighean ùra air an leasachadh stèidhichte air innleachd PCR airson diofar adhbharan deuchainn.Mar eisimpleir, is urrainn don PCR cainneachdail fìor-ùine lorg bhìorasach;in situ PCR air a chleachdadh gus galar bhìoras aithneachadh ann an clò no ceallan;Faodaidh am PCR neadachaidh sònraichteachd PCR àrdachadh.Nam measg, chaidh PCR cainneachdail fìor-ùine a leasachadh nas luaithe.Chaidh mòran de dhòighean ùra, leithid probe hydrolysis TaqMan, probe hybridization, agus probe beacon moileciuil, a chur còmhla ann an dòigh PCR cainneachdail fìor-ùine, a tha air a chleachdadh gu farsaing ann an rannsachadh clionaigeach.A bharrachd air a bhith ag aithneachadh an luchd viral ann an lionn bodhaig euslaintich gu ceart, faodar an dòigh seo a chleachdadh cuideachd gus mutant fulangach do dhrogaichean a lorg.Mar sin, tha PCR cainneachdail fìor-ùine air a chuir an sàs sa mhòr-chuid ann am measadh buaidh leigheasach agus sgrùdadh fulangas dhrogaichean.
C. Lorgadh àrd-threòrachadh de dh'aigéid niuclasach viral
Gus coinneachadh ris na feumalachdan airson breithneachadh luath air galairean gabhaltach ùra, chaidh grunn dhòighean lorgaidh àrd-thoradh, leithid sgoltagan DNA (DNA), a stèidheachadh.Airson sgoltagan DNA, tha probes sònraichte air an co-chur agus air an ceangal ri sgoltagan beaga sileacain ann an dùmhlachd fìor àrd gus microarray probe DNA (DNA) a chruthachadh a ghabhas tar-chinealach le sampall.Faodar an comharra tar-chuiridh a dhealbhadh le miocroscop confocal no sganair laser agus a bhith air a phròiseasadh tuilleadh leis a’ choimpiutair agus gheibhear seata dàta mòr a thaobh diofar ghinean.Tha dà sheòrsa de chip DNA ann.Tha an “synthesis chip” mar a leanas: tha na oligonucleotides sònraichte air an co-chur gu dìreach air na sgoltagan.Is e fear eile sliseag pool DNA.Tha na ginean clonaichte no toraidhean PCR air an clò-bhualadh gu òrdail air an t-sleamhnag.Is e buannachd teicneòlas chip DNA lorg aig an aon àm air meud mòr de shreathan DNA.Is urrainn don dreach as ùire de chip lorg pathogen còrr air 1700 bhìoras daonna aithneachadh aig an aon àm.Dh’ fhuasgail teicneòlas chip DNA na duilgheadasan a thaobh dòighean tar-chuir searbhag niuclasach traidiseanta agus tha tagraidhean gu math farsaing aige ann am breithneachadh bhìorasach agus sgrùdadh epidemio-eòlasach.
Ùine puist: Dùbhlachd-23-2020